Imaginea nr.1
Pseudomonas spp., frotiu Gram
Rezultatul investigaţiilor de laborator
depinde de calitatea recoltării, de
aceea este imperioasă respectarea
condiţiilor standard de recoltare şi
transport ş3;18;22;25 - 29;34;43;44;
53;83;84;86ţ pentru toate produsele
patologice.
Prelucrarea produselor patologice în
laborator se face în funcţie de procedurile
specifice pentru fiecare tip de
produs patologic, conform standardelor
ş42ţ ş11ţ ş33ţ ş3;4;7;9;22;25;27-
32;34;43;44; 48;57;61;62; 69;73;78-
80;98;104ţ.
Examenul microscopic direct - frotiul
din produsul patologic-, colorat Gram
ş83ţ ş72ţ ş58ţ ş47ţ ş82ţ evidenţiază
bacili Gram negativi (vezi imaginea
nr.1),drepţi sau uşor încurbaţi 0,5 -
0,8 x 1,5- 3,0 microni metru, aşezaţi
izolat, în perechi sau scurte lanţuri,
intra şi perileucocitari.
Dacă materialul din focarul de infec-
ţie se caracterizează prin abundenţa
celulelor inflamatorii şi prezenţa bacililor
Gram negativi, materialul de contaminare
se caracterizează prin prezenţ
a celulelor epiteliale, scuamoase
eventual încărcate cu numeroase
bacterii de contaminare ş26ţ ş105ţ.
Din flacoanele de hemocultură pozitive
se fac frotiuri Gram care eviden-
ţiază prezenţa bacililor Gram negativi
ş98ţ.
Rezultatul examenului microscopic
direct este un diagnostic rapid ş112ţ
care se trimite în secţie, sub forma
unui "rezultat preliminar", având rolul
de a informa clinicianul asupra calităţ
ii produsului patologic recoltat,
identificării microscopice a bacteriei
care a produs infecţia, fiind primul
criteriu empiric pentru ghidarea
antibioterapiei în cazul infecţiei.
|
 |
Pseudomonas aeruginosa,
aspectul coloniilor pe agar
Cultivare şi izolare
Pseudomonas spp. sunt bacterii nepretenţ
ioase, de aceea cresc cu usurinţă
pe medii uzuale, cu un PH neutru.
Geloza sange 5% şi chocolate agar se
folosesc pentru însămânţarea produselor
patologice ca LCR, lichid
articular, lichid dializă peritoneală, în
care nu se anticipă o floră mixtă ş96ţ.
Pentru izolarea Pseudomonas spp. din
produsele patologice cu flora mixtă se
folosec medii selective, ca de exemplu
MacConkey (excepţie face P.
vesicularis), mediu cu cetrimide sau
eosin-methylen blue agar ş96ţ.
Incubare
Pseudomonas spp. creşte în condiţii
aerobe de incubareş103ţ, la temperatura
de 35-37 grade, unele specii
cresc greu la această temperatură şi
plăcile se reincubează la 30 grade
sau la temparatura camerei pentru
încă două zile ş46ţ. Capacitatea
Ps.aeruginosa ş2ţ de a creşte la 42
grade îl diferenţiază de Ps. fluorescens
şi Ps. Putida.
Identificare
a) pe baza caracterelor de cultură:
• Ps. aeruginosa, Ps. fluorescens,
Ps. Putida
Izolatele de Ps. aeruginosa sunt uşor de
recunoscut pe baza aspectului coloniei,
producerii de pigment difuzibil, a mirosului
caracteristic de "flori de tei". Coloniile
sunt mari, uşor convexe, cu margini
neregulate, cu luciu metalic, pe
geloza sânge coloniile sunt hemolitice.
Pseudomonas aeruginosa este capabil
să producă un număr de pigmenţi
solubili, pioverdină (galben - verde
fluorescent, deasemenea produs de P.fluorescens şi
|
|
Piocianina - pigment albastru
P.putida) difuzibil în
mediu, piorubina (culoare roşie),
piomelanina (culoare maro).
Piocinina, pigmentul albastru, nu este
produs de nici o altă specie decât de
Ps.aeruginosa. Ocazional tulpini de
Ps.aeruginosa nu produc pigment sau
produc un pigment galben - verde
care nu-l diferenţiază de Ps.fluorescens,
Ps.putida. Colonii nepigmentate
de Ps.aeruginosa, mucoide pot fi
izolate din secreţiile traheale ale
pacienţilor cu fibroză chistică ş49ţ.
• Ps.stutzeri
Grupul Ps.stutzeri este alcătuit din urmă
toarele trei organisme: Ps.stutzeri,
CDC grup Vb -3, şi Ps. mendocina.
Ps. stutzeri formează colonii uscate,
zbârcite, aderente de agar, maron.
Însă nu toate tulpinile de Ps. stuzeri
prezintă aceste aspecte, de aceea
sunt greu de diferenţiat de alte
pseudomonade.
• Ps.alcaligenes, Ps.pseudoalcaligenes,
Pseudomonas spp.CDC
grup 1.
Coloniile nu prezintă aspecte particulare
• Ps.diminuta şi Ps.vesicularis.
Coloniile de Ps.diminuta sunt albe, în
timp ce multe tulpini de Ps.vesicularis
produc un pigment orange intracelular.
b) identificarea biochimică trebuie să
respecte următoarele condiţii ş55;96ţ:
• inocul din cultură pură, proaspată
de 18 - 24 ore
• oxidază şi catalază pentru toţi
bacilii Gram negativi înainte de a
selecta testele de identificare .
Începând din anul 1896 eforturile de
a găsi un substrat biochimic pentru o
diferenţiere corectă şi rapidă, la nivel
de specie, a tulpinilor izolate au fost |
